ddPCR又称微滴式数字PCR,droplet digtial PCR。ddPCR是一种使用微流体和专有表面活性剂化学物质,将PCR样品分成油包水液滴进行数字PCR的方法。
ddPCR能够对样品中的核酸进行绝对定量。一个样品可以被分成约20,000 个液滴,在每个单独的液滴中模板分子进行 PCR 扩增。ddPCR 技术使用的试剂和工作流程类似于大多数基于
TaqMan 探针的标准。PCR后,分析或读取每个液滴以确定原始样品中 PCR 阳性液滴的比例。然后使用泊松统计分析这些数据以确定原始样品中的目标 DNA 模板浓度,以每微升的拷贝数表示。
1.ddPCR可以应用基因表达检测(GEX,包括DNA、mRNA以及非编码RNA拷贝数的绝对定量)
2.精准的拷贝数变异(CNV)检测;
3.病毒荷载量的定量检测;
4.低水平的病原体的定量检测;
5.罕见事件检测 (RED) (包括稀有突变检测(RMD)和稀有序列检测(RSD))以及 SNP 检测;
6.同时可以用于二代测序辅助建库等等。