细胞/动物实验

细胞是生物体基本的结构和功能单位,了解细胞的各项生命指标和特征——探究生命个体

细胞增殖/凋亡/周期

1、细胞凋亡实验

         细胞凋亡又称程序性死亡,是机体主动的、高度有序地清楚无用细胞的过程。 凋亡开始以后发生的第一个事件是细胞膜发生了外翻,位于膜内的磷脂酰丝氨酸(PS)翻转到了膜外侧。

         第二个事件是线粒体膜电位发生变化,细胞色素C释放,接下来Caspase通路被激活,最后的事件是DNA片段化,细胞形成凋亡小体,完成了整个凋亡过程。

2、细胞周期实验

         检测细胞周期最常用的方式就是检测细胞DNA含量,正常生长的细胞都会经历分裂过程,G0/G1期是两倍体时期,S期DNA开始合成,到G2/M期,细胞处于四倍体时期,之后细胞一分为二,进入下一个细胞周期。

实验步骤:
         A、 收集并用PBS重悬细胞(每管约10^6cells),洗涤两次;
         B、 使用1mL的PBS重悬细胞于离心管内,并保持离心管在涡旋振荡仪维持细胞一直处于混匀的状态,然后一滴一滴的加入无水乙醇;
         C、 在4℃固定至少1小时,或者-20℃过夜;
         D、 使用PBS洗涤两次,并加入500ul的PI/RNase染色试剂,混匀室温避光孵育15min;
         E、 上机检测。
         对于一般的PI检测,可以用-20度预冷的75%乙醇固定,使用PI/Rnase染色液染色。实验流程中固定过程十分关键。不同的细胞对固定的过程敏感度不一致,所以需要做预实验尝试。

3、细胞增殖实验

         细胞增殖实验可以用细胞增殖染料来检测。用染料染色之后,细胞质会与染料结合,分裂一代之后胞浆内染料浓度减半,再次分裂,胞浆内染料浓度降低为原来的四分之一。随着分裂代数的增加,染料浓度逐渐降低。