从生物体内取出组织或细胞,在体外模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,对这些组织或细胞进行孵育培养,使之保持一定的结构和功能,以便于我们观察研究,这种方法就是细胞培养。
原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养
。
当细胞在培养瓶中长到一定密度都会因为接触抑制而停止生长,之后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需,但培养皿中的细胞很容易受到外界污染,所有操作要在严格的无菌条件下进行。
细胞转染是指将外源分子导入真核细胞内以改变其基因型或表型能力的一种技术。转染的主要目的是研究基因的功能或基因产物,通过增强或抑制特定基因在细胞中的表达,并在哺乳细胞中产生重组蛋白。
常用的转染方法有以下几种:
1. 物理介导:电穿孔法、显微注射和基因枪;
2. 化学介导:磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物法和脂质体转染方法
3. 生物介导:病毒介导法。