RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded
RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于RNA具有高度的序列专一性和有效的干扰,可以特异将特定基因沉默,从而获得特定基因的功能丧失或者基因表达量降低。
干扰细胞株的筛选:通过慢病毒法将shRNA干扰载体转入细胞中,根据预先摸索的最佳药筛浓度,对细胞进行药物筛选,直到对照组细胞全部死亡,获得基因干扰的稳定细胞株。
过表达载体的构建:将目的基因编码区序列(CDS)克隆到相应的质粒或病毒载体上,利用骨架上构建的启动子驱动目的基因表达,此外,可选择报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。
过表达细胞株的筛选:通过慢病毒感染法或核转染法将过表达载体转入细胞中,根据预先摸索的最佳药筛浓度,对细胞进行药物筛选,直到对照组细胞全部死亡,获得基因稳定表达的细胞株。