1、iTRAQ

简介

         iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation) 是一种多肽体外标记技术，该技术采用4种或8种同位素编码的标签，可与氨基酸 N 端及侧链的伯胺基团发生反应进行标记，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量，是近年来常用的高通量筛选技术。
         iTRAQ 标记试剂在结构上包括3个化学基团，分别是报告基团、平衡基团和反应基团。不同样本的同一肽段被标记后表现为相同的质荷比，在一级质谱检测中表现为同一个质谱峰。此质谱峰在二级质谱检测中，不同的报告基团被释放，产生质量不同的报告离子，根据报告离子的丰度可获得样本间相同肽段的定量信息。

技术优势

         1. 通量高：一次实验即可对数千种蛋白进行定量分析，并且最多可同时对 8 份样本进行定量分析，通量远胜于传统的双向电泳；
         2. 结果可靠：蛋白分析的灵敏度，特异性及重复性远高于双向电泳，并且定性与定量分析同步完成，确定结果准确性定性；
         3. 覆盖广泛：鉴定与定量分析样本中表达的所有已知蛋白，包括高分子量蛋白、酸碱性蛋白、膜蛋白和不溶性蛋白等；
         4. 支持关联分析：综合上游转录组等实验数据，提供多组学关联分析。

2、TMT

简介

         TMT（Tandem Mass Tag）与 iTRAQ 一样，也是一种多肽体外标记技术。该技术采用 6 种或 10 种同位素标签标记蛋白多肽 N 末端或赖氨酸侧链基团，通过串联质谱分析，可灵活比较最多 10 种不同样本中蛋白质的相对含量和绝对含量。
         TMT 与 iTRAQ 标记的原理基本一致，TMT 标记试剂在标记肽段样本后，报告基团和平衡基团的平衡分子量都为229，不同同位素标记的同一多肽在第一级质谱检测中分子量完全相同。而在串联质谱（MS/MS）中，同重元素标记肽段的报告基团、平衡基团和肽反应基团之间的连接键断裂，平衡基团中性丢失，不同同位素标签的同一肽段产生不同的质荷比的峰。因此，根据波峰的高度和面积，可获得样品间相同肽段的定量信息。有研究表明【1】：TMT定量蛋白组优于iTRAQ定量蛋白组，TMT定量鉴定会得到最多的蛋白数量，并且TMT标记更敏感，噪音信号水平更低。

技术优势

         1. 适用范围广：几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定。
         2. 通量高：能同时对 10 组样本中包含的蛋白进行鉴定及表达差异分析。
         3. 分析效率高：液相色谱与串联质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

3、技术流程

4、部分结果展示

         参考文献：【1】Sandberg A, Branca RM, Lehtiö J, Forshed J. Quantitative accuracy in mass spectrometry based proteomics of complex samples: the impact of labeling and precursor interference. J Proteomics. 2014